儲存型液氮罐在實(shí)驗室生物實(shí)驗中的使用規范

一、細胞培養中使用液氮罐的一般程序

     細胞培養的一般過(guò)程，主要包括準備、取材、培養和凍存復蘇4步。為保存細胞，細胞株如果是不易突變的情況下一定要使用液氮深冷凍存。使用常規的液相液氮罐，一般實(shí)驗室使用35升125口徑儲存型液氮罐，先將細胞處理，把含有保護劑的培養基加入凍存管內，管內放有需要凍存的細胞，利用程序降溫儀，或者使用冰箱梯度降溫，后在液氮中長(cháng)期保存。在-196度保存條件下，細胞保存的時(shí)間幾乎是無(wú)限的。

目前美國標準細胞庫或細胞銀行(ATCC)液氮凍存有3200個(gè)已經(jīng)過(guò)鑒定的細胞系(1992)，其中包括來(lái)自正常人和各種疾病患者的皮膚成纖維細胞系和來(lái)自不同物種的近75個(gè)雜交瘤細胞株。

二、胚胎冷凍保存技術(shù)

胚胎冷凍保存技術(shù)是指在低溫條件下利用低溫保護劑保存胚胎的一門(mén)技術(shù)。這一技術(shù)是20世紀后半葉隨著(zhù)人工授精技術(shù)廣泛應用而產(chǎn)生的，目前已成為了現代生命科學(xué)研究*的手段之一。動(dòng)物胚胎的冷凍保存原理就是因為低溫降低了胚胎內的變質(zhì)反應速度，細胞保存的溫度越低，細胞及生物樣品的保存時(shí)間就越長(cháng)。

目前已經(jīng)有很多種生物制品細胞胚胎等的冷凍保存深冷保存方法，包括慢速冷凍法、快速冷凍法、一步冷凍法、直接移植深冷法和玻璃冷凍，超級冷凍法都可以快速冷凍

①將胚胎在室溫下放人25％玻璃化溶液(VS液)中預處理15min；

②將預處理后的胚胎放在高濃度(75％一90％)的VS液中保存20—40min；

③將經(jīng)過(guò)兩步抗凍劑處理的胚胎直接投入液氮中保存。

此外還可以用液氮罐保存菌種、疫苗、骨組織、精子等物質(zhì)，均可達到很好的長(cháng)期存儲的效果